1 组培苗的培养
外植体是影响再生体系愈伤组织诱导、不定芽分化和不定芽生根形成的关键因素。其次,外植体选择是否适宜直接关系到其入瓶的难易。实验时,以韭菜优秀杂交组合12C15的花器官为外植体,在韭菜花前期选择蕾期花苞。选取时,选择韭菜花苞2~3天后苞膜即可裂开的韭菜花蕾(未开花薹)做为外植体,流水冲洗30分钟以上,无菌操作台上,将水吸净,然后经75%乙醇浸泡2min后用10%的次氯酸钠溶液浸泡8min消毒后,蒸馏水浸洗,吸干水分,切取韭菜花盘接种在MS+6BA固体培养基上,在一定条件下培养得到无菌花蕾,然后将切取无菌花盘、花苞直接接种到MS +2.0mg/L 6-BA+ 1.5 mg/L NAA培养基上形成愈伤组织,诱导不定芽,不定芽伸长形成韭菜芽体,切取大小相同或相近部位的芽体进行定量转接到1/2MS+0.4mg/LIBA培养基上,每瓶转接30株~50株,进行诱导生根,从而形成韭菜植株。
2 60Co-γ辐射诱变
选取54瓶长势相近的组培苗进行分组,每6瓶为一组,共9组。辐射剂量分别为0GY、8GY、10GY、12GY、14GY、15GY、16GY、20GY、25GY,在实验室60Co-γ辐射的适宜空间采用单侧竖排法,诱变剂量率为1GY/min。诱变完成后将组培苗瓶放于室温下进行培养,7天后将瓶口打开,放置2天~3天后将苗子进行栽培。
3 适宜剂量及致死剂量的筛选
组培苗栽培后,及时浇水,后期进入正常管理。缓苗后7天、10天、15天、20天、25天、40天、60天分别进行调查,调查指标分为:组培苗成活数、叶色、叶宽、假茎粗、假茎软硬度、目测变异数等。据综合考量,本次采用60Co-γ辐射进行诱变育种,适宜剂量区间为10GY~12GY,致死剂量为20GY。
4讨论
本次韭菜组培苗的辐射诱变是韭菜育种过程中的一种探索,因没有可参阅的学术材料,所以记录的各项变异指标没有可比性。该数据的初步确定为韭菜辐射育种提供了可供参考的依据,但实验数据尚需进一步的完善。