培养基的配制 - 廊坊市农林科学院
欢迎访问廊坊市农林科学院官网!
当前位置:
  • 首页
  • 农时技术
  • 培养基的配制

    61626 阅读 2012-07-26 发布时间

     

    植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。MS培养基的配制包括以下步骤。
    培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时,取其总量的1/20(50 mL)1/200(5 mL),加水稀释,制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用。
    大量元素(母液)         mgL
    NH4NO3                      33 000
    KNO3                        38 000
    CaCl2·2H2O              8 800
    MgSO4·7H2O              7 400
    KH2PO4                      3 400
    微量元素(母液)
    KI                       166
    H3BO3                       1 240
    MnSO4·4H2O               4 460
    ZnSO4·7H2O               1 720
    Na2MoO4·2H2O            50
    CuSO4·5H2O              5
    CoCl2·6H2O              5
    铁盐(母液)
    FeSO4·7H2O              5 560
    Na2-EDTA·2H2O           7 460
    有机成分(母液)
    A
    肌醇                      20 000
    B
    烟酸                       100
    盐酸吡哆醇(维生素B6)        100
    盐酸硫胺素(维生素B1)        100
    甘氨酸                     400
    以上各种营养成分的用量,除了母液20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液。
    上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。其中,母液、母液及母液的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L
    母液的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2ONa2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5.5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中。
    各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中。
    MS培养基中还需要加入24-二氯苯氧乙酸(24-D)、萘乙酸(NAA)6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(0.1 mg/mL)。其配制方法是:分别称取这3种物质各10 mg,将24-DNAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/LNaOH溶液溶解,溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液。
    配制培养液用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量:母液50 mL,母液AB5 mL。再取24-D 5 mLNAA 1 mL,与各种母液一起放入烧杯中。
    配制培养液时应注意:在使用提前配制的母液时,应在量取各种母液之前,轻轻摇动盛放母液的瓶子,如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染,应立即淘汰这种母液,重新进行配制;用量筒或移液管量取培养基母液之前,必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次;量取母液时,最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上,量取1种,划掉1种,以免出错。
    溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中,再加入蒸馏水750 mL,用电炉加热,边加热边用玻璃棒搅拌,直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中,最后加蒸馏水定容至1 000 mL,搅拌均匀。
    需要注意的是,在加热琼脂、制备培养基的过程中,操作者千万不能离开,否则沸腾的琼脂外溢,就需要重新称量、制备。此外,如果没有搪瓷量杯,可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水,否则加热时烧杯容易炸裂,使溶液外溢,造成烫伤。
    pH用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/LNaOH溶液,逐滴滴入溶化的培养基中,边滴边搅拌,并随时用精密的pH试纸(5 47 0)测培养基的pH,一直到培养基的pH5 8为止(培养基的pH必须严格控制在5 8)
    培养基的分装溶化的培养基应该趁热分装。分装时,先将培养基倒入烧杯中,然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50 mL100 mL)中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/51/4。每1 000 mL培养基,可分装2530瓶。
    培养基分装完毕后,应及时封盖瓶口。用2块硫酸纸(每块大小约为9 cm×9 cm)中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口,并用线绳捆扎。最后在锥形瓶外壁贴上标签。
    高压灭菌培养基的高压灭菌包括以下几个步骤。
    第一,码放锥形瓶。将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中,再放入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐,可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。
    第二,放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内,如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶(以上物品都要用牛皮纸封口),用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等。
    第三,灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕,盖上锅盖。在98 kPa121.3 下,灭菌20 min
    灭菌后取出锥形瓶,让其中的培养基自然冷却凝固。最好放置1 d后再使用。
     
    主办单位:廊坊市农林科学院     地址:廊坊市广阳道285号农林科技大厦     电话:0316-2189909
    备案序号:冀ICP备13021151号-1     公安备案:冀公网安备 13100302000548号
    廊坊市农林科学院 版权所有 ©Copyright 2021 All Rights Reserved.
    扫码关注廊坊农科院公众号
    扫码关注廊坊农科院公众号